细胞核-胞浆-胞膜制备试剂盒 P1201--北京普利莱基因技术有限公司
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    细胞核-胞浆-胞膜制备试剂盒 P1201

    货号

    产品名称

    规格

    价格

    P1201-50

    细胞核-胞浆-胞膜制备试剂盒

    50次

    650元

    P1201-100

    细胞核-胞浆-胞膜制备试剂盒

    100次

    1080元

     

    描述:本试剂盒能够从哺乳动物新鲜或冻存的组织块、贴壁或悬浮细胞中制备细胞核、细胞膜与胞内质膜、细胞浆等三种主要亚细胞组分。其独特的试剂成分与优化的制备方案使细胞核-胞浆-胞膜制备过程简单易行,无需特殊设备和超速离心,可在1小时内完成。应用本试剂盒制备的胞膜是细胞膜和细胞器膜如线粒体、内质网及质膜的混合物;得到的细胞核是完整的未裂解细胞核,胞浆组分为可溶性胞浆蛋白。制备得到的产物纯度可胜任后续的免疫沉淀、蛋白印迹、2-D gel、酶活性检测和受体分析等实验。

     

    规格:50次  100次

    储存: 4℃  12个月有效

     

    操作步骤:

    1、 样本预处理

    2、  组织细胞匀浆裂解

    3、 粗提物制备

    4、 胞膜胞浆制备

    5、 细胞核制备:

    说明:

    1.        Suspension Buffer 不含去垢剂,重悬于Suspension Buffer 中的胞膜或胞核组分呈不溶解状态是正常的,用户可用自备溶液重悬胞膜或胞核成分。如果进行蛋白印迹、2-D get等实验,用户可用SDS上样缓冲直接裂解细胞膜或细胞核成分。对于进行免疫共沉淀实验来说,可用RIPA裂解液(C1053)重悬胞膜或胞核组分。

    2.        胞浆组分可直接进行蛋白定量。胞核组分如需定量可加入TritonX-100至终浓度1%或SDS至终浓度0.5%用BCA法蛋白定量。

    3.        用SDS-PAGE Loading 缓冲液裂解细胞核后,DNA释放会使核裂解物十分粘稠,可95oC加热5分钟,高速震荡打断DNA,重复加热2-3次。

    4.        如果进行凝胶阻滞(EMSA)实验,建议使用普利莱P1200产品,该试剂盒可直接提取可溶性核蛋白.

    5.        试剂盒各组分中未添加蛋白酶抑制剂,用户可自行选择添加,通常4oC快速操作不加蛋白酶抑制剂不会出现问题。

    6.        沉淀胞浆蛋白方法:估算胞浆蛋白组分的体积,加入1/3体积30%三氯醋酸水溶液,-20 oC沉淀1小时或过夜。5,000g, 4 oC离心10分钟,弃上清,空气略干沉淀。用1xSDS上样缓冲液溶解沉淀,95oC加热5分钟,上样电泳。

     

    以下仅列举数篇使用普利莱P1201试剂盒发表的文章供参考。

    1、  Wu S, Yue Y, Tian H, et al. Tramiprosate protects neurons against ischemic stroke by disrupting the interaction between PSD95 and nNOS[J]. Neuropharmacology, 2014, 83: 107-117.

    2、  Xu S, Wang P, Wei K, et al. Cytoprotection of perfluorocarbon on pmvecs in vitro[J]. Inflammation, 2013, 36(2): 512-520.

    3、  Yao X, Chen H, Li Y. Protective effect of bicyclol on liver injury induced by hepatic warm ischemia/reperfusion in rats[J]. Hepatology Research, 2009, 39(8): 833-842.

    4、  Yan S, Zhou C, Zhang W, et al. β-Catenin/TCF pathway upregulates STAT3 expression in human esophageal squamous cell carcinoma[J]. Cancer letters, 2008, 271(1): 85-97.

    5、  Shi L L, Yang W N, Chen X L, et al. The protective effects of tanshinone IIA on neurotoxicity induced by β-amyloid protein through calpain and the p35/Cdk5 pathway in primary cortical neurons[J]. Neurochemistry international, 2012, 61(2): 227-235.

    6、  Yang X Y, Zhao N, Liu Y Y, et al. Inhibition of NADPH oxidase mediates protective effect of cardiotonic pills against rat heart ischemia/reperfusion injury[J]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2013, 2013.

    7、  Song X Y, Xu S, Hu J F, et al. Piperine prevents cholesterol gallstones formation in mice[J]. European journal of pharmacology, 2015, 751: 112-117.

    8、  ZHAO H A I P, Feng J, Sun K, et al. Caffeic Acid Inhibits Acute Hyperhomocysteinemia‐Induced Leukocyte Rolling and Adhesion in Mouse Cerebral Venules[J]. Microcirculation, 2012, 19(3): 233-244.

    9、  Hao H F, Liu L M, Liu Y Y, et al. Inhibitory effect of rhynchophylline on contraction of cerebral arterioles to endothelin 1: Role of rho kinase[J]. Journal of ethnopharmacology, 2014, 155(1): 147-153.

    10、       Li A Q, Zhao L, Zhou T F, et al. Exendin-4 promotes endothelial barrier enhancement via PKA-and Epac1-dependent Rac1 activation[J]. American Journal of Physiology-Cell Physiology, 2015, 308(2): C164-C175.

    11、       Zhao L, Li A Q, Zhou T F, et al. Exendin-4 alleviates angiotensin II-induced senescence in vascular smooth muscle cells by inhibiting Rac1 activation via a cAMP/PKA-dependent pathway[J]. American Journal of Physiology-Cell Physiology, 2014, 307(12): C1130-C1141.

    12、       Tai W, Ye X, Bao X, et al. Inhibition of Src tyrosine kinase activity by squamosamide derivative FLZ attenuates neuroinflammation in both in vivo and in vitro Parkinson's disease models[J]. Neuropharmacology, 2013, 75: 201-212.

    13、       Wang Q, Lin Y, Zhang W, et al. Lead induces dysregulation of iron regulatory protein 1 via the extracellular signal-regulated kinase pathway in human vascular endothelial cells[J]. Brain research, 2012, 1455: 19-27.

    14、       Miao Y, Dong L D, Chen J, et al. Involvement of calpain/p35-p25/Cdk5/NMDAR signaling pathway in glutamate-induced neurotoxicity in cultured rat retinal neurons[J]. PloS one, 2012, 7(8): e42318.

    15、       Liu X D, Yang J J, Fang D, et al. Functional Upregulation of Nav1. 8 Sodium Channels on the Membrane of Dorsal Root Ganglia Neurons Contributes to the Development of Cancer-Induced Bone Pain[J]. PloS one, 2014, 9(12): e114623.

    16、       Liu M, Yang H, Fang D, et al. Upregulation of P2X3 receptors by neuronal calcium sensor protein VILIP-1 in dorsal root ganglions contributes to the bone cancer pain in rats[J]. Pain, 2013, 154(9): 1551-1568.

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